От AEEA мономер до димер

Съотношението лекарство към антитяло (DAR) е ключов атрибут на качеството на конюгираните с антитела лекарства (ADC), който пряко влияе върху ефикасността и токсичността. Идеалният DAR обикновено е 2-4, но много ефективни полезни товари като MMAE и DM1 имат силна хидрофобност. Когато се използват късоверижни или единични PEG линкери, DAR над 4 води до ускорено агрегиране и изчистване на антитела. Въвеждането на AEEA-AEEA осигурява ефективно решение на този проблем.
В сравнение с един AEEA линкер,AEEA-AEEAудвоява дължината на PEG веригата и има по-силна хидрофилност. Всяка димерна единица допринася за 4 етерни връзки и 2 амидни връзки, които могат да свържат повече водни молекули и да образуват по-плътен хидратиращ слой. Когато множество хидрофобни лекарства са свързани към повърхността на антитялото чрез AEEA-AEEA, хидратиращият слой може ефективно да предпази хидрофобните взаимодействия между лекарствата и да предотврати агрегацията на антитела. Експерименталните данни показват, че ADC, конструирани с помощта на AEEA-AEEA, поддържат колоидна стабилност (скорост на агрегиране<5%) even when DAR reaches 6-8, while the control using single AEEA shows significant precipitation when DAR>4.
Стратегията за регулиране на DAR се отнася до предварителното свързване на AEEA-AEEA с лекарство в насочена към мястото технология за свързване и след това реагира с конструиран цистеин върху антитялото. Чрез регулиране на моларното съотношение на линкерно лекарство към антитяло (обикновено 3:1 до 10:1), стойността на DAR може да бъде прецизно контролирана. Например, 2-кратен излишък може да даде продукт DAR2, 4-кратен излишък може да даде DAR4, а 8-кратен излишък може да постигне DAR6-8. HIC-HPLC или масспектрометрия може точно да определи разпределението на DAR. За туморни индикации, изискващи високо натоварване, като рак на гърдата с ниска експресия на HER2 и дребноклетъчен рак на белия дроб, AEEA-AEEA прави възможен висок DAR и значително подобрява ефекта на убиване на тумора. Предклиничните проучвания показват, че ADC на DAR6 повишава скоростта на инхибиране на тумора с около 40% в сравнение с ADC на DAR4 при същата доза, без значително увеличаване на токсичността.